蛋白质性质与研究方法
蛋白质结构的研究方法
高分辨率法
- X-ray（X射线晶体学）
- NMR（核磁共振波谱法）
- Cryo-ME（冷冻电子显微镜）
结构预测与计算方法
- AlphaFold
蛋白质性质和大小
蛋白质性质
- 能发生两性解离，有等电点
- 等电点时，蛋白质的溶解度、导电性、渗透压、黏度均最低
蛋白质是亲水胶体
可逆沉淀
- 温和条件下，改变溶液的pH或电荷状态，使蛋白质沉淀
- 结构和性质都没有发生改变
- 适当情况下，可重新溶解，又称非变性沉淀
- 是纯化和分离蛋白质的基本方法，如等电点沉淀法、盐析法和有机溶剂沉淀法等
不可逆沉淀
- 在强烈条件下，不仅破坏能胶体溶液的稳定性，而且破坏了蛋白质的结构和性质
- 产生的蛋白质不可能重新再溶解
- 称为变性沉淀，又称凝固
蛋白质大小
根据化学组成测定最低分子量
沉降分析
沉降系数：生物大分子、亚细胞器和微生物等颗粒在单位离心场中的沉降速度为沉降系数（s），单位用S，为
蛋白质的颜色反应
蛋白质分离提纯的一般原则
层析
凝胶过滤
凝胶层析是按照蛋白质分子量大小进行分离的技术，又称之凝胶过滤、分子筛层析
分子越小，出来的速度越慢
离子交换层析
利用一定pH下不同蛋白质带电种类和电量的差异，柱介质是结合着带电基团的合成聚合物
结合着阴离子的称为阳离子交换树脂，结合阳离子的被称为阴离子交换树脂
阳离子交换树脂里面带着负电荷
阴离子交换树脂里面带着正电荷
亲和层析
依赖于蛋白质和它的配体之间的相互作用来分离
电泳
在外电场作用下，带电蛋白质将向与其电性相互的电极移动的现象，一般不用于纯化大量蛋白质，常作为一种分析手段
SDS-PAGE
SDS = 十二烷基磺酸钠
PAGE = 聚丙烯酰胺凝胶电泳
- 纯度检测：亚基组成分析，分子量测定
- SDS使得蛋白质解离，所测分子量代表寡居蛋白亚基的分子量
等电聚焦
利用聚丙烯酰胺凝胶内的缓冲液在电场作用下在凝胶内沿电场方向制造一个pH梯度
每种蛋白将迁移到与它pI相一致的pH处
双向电泳
蛋白质的透析和超滤
透析法
透析是利用蛋白质分子不能通过半透膜的性质，将蛋白质和其他小分子物质分开
超滤
利用压力或离心力，强行将水或其他小分子溶质通过半透膜，而将蛋白质截留在膜上，从而达到浓缩和脱盐的目的